Регистрация опыта с лизоцимом

Пробирки Составляющие Результаты
Физиологический раствор Взвесь микробов Яичный белок в разведении 1:25
Контроль 1 мл 1 мл
Опыт 1 мл 1 мл

Контрольные вопросы

Какие правила нужно соблюдать при взятии и пересылке материала для бактериологического исследования?

Что такое бактериемия?

Что такое септицемия (сепсис)?

Что такое септикопиемия?

В чем заключается подготовка погибшего животного к вскрытию?

Какие Регистрация опыта с лизоцимом условия нужно соблюдать при вскрытии заразительного трупа?

В каком порядке делается вскрытие и исследование трупов животных?

Какой материал в большинстве случаев берется для бактериологического исследования?

Как делается взятие крови из трупа животного?

Как делается взятие материала для посевов из органов трупа животного?

Что такое иммунитет?

Какие виды иммунитета в отношении Регистрация опыта с лизоцимом заразных заболеваний вы понимаете?

Каковы анатомо-физиологические механизмы естественной резистентности?

Каковы главные направления в развитии современной иммунологии?

Какие клеточки владеют фагоцитарной активностью?

Какое различие меж завершенным и незавершенным фагоцитозом?

Из каких фаз состоит фагоцитарный процесс?

Кто является создателем фагоцитарной теории иммунитета?

Как фиксируются препараты-мазки для исследования фагоцитоза?

Что такое Регистрация опыта с лизоцимом бактериотропины и опсонины?

Что такое фагоцитарное число?

Что такое опсонический индекс?

Как определяют фагоцитарное число и опсонический индекс?

Что такое лизоцим, какова его хим природа?

Где содержится лизоцим в человеческом организме?

В чем проявляется действие лизоцима на бактерии?

Как ставится опыт для исследования деяния лизоцима на бактерии?

Приложение Регистрация опыта с лизоцимом к ЗАНЯТИЮ 15.

Иммунитет - это метод защиты организма от живых тел и веществ, несущих на для себя признаки на генном уровне чужеродной инфы.

Рис.1.Схема вскрытия животного

З А Н Я Т И Е16

Дата ______________

Тема: Антигены и антитела. Серологический способ диагностики заразных болезней. Реакция агглютинации (РА), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Реакция преципитации Регистрация опыта с лизоцимом (РП). Реакция связывания комплемента (РСК).

План занятия:

1. Антигены. Виды антигенов: корпускулярные, растворимые. Ток­сины, анатоксины. Изготовление антигенов.

2. Антитела. Иммунные сыворотки. Получение иммунных сывороток.

3. Реакции иммунной сыворотки. Реакция агглютинации:
а) на стекле;

б) в пробирке.

4. Антигены бактериальной клеточки. "0"-,"Н"-, "К"-антигены , их характеристики. Изготовление "О" и "Н"-антигенов. Реакция Регистрация опыта с лизоцимом агглютинации на стекле с "О" и "Н"-антигенами.

5. Тканевые антигены. Эритроциты. Реакция агглютинации эритроцитов - гемагглютинация.

6. Понятие о титре агглютинирующей сыворотки. Определение титра агглютинирующей сыворотки, с "Н"-антигеном.

7. Внедрение традиционного минзурочного способа реакции
агглютинации для:

а) определения титра антител в сыворотке хворого (серологический способ диагностики);

б) определения антигенного строения выделенного возбудителя Регистрация опыта с лизоцимом (серологическая идентификация возбудителя в процессе бактериологического исследования).

8. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), либо непрямой гемагглютинаций (НПГА). Варианты использования РПГА.

9. Варианты реакций агглютинации на стекле, которые употребляют
в качестве способов экспресс-диагностики:

а) реакция коагглютинации;

б) реакция латекс-агглютинации;

в) реакция агрегат-гемагглютинации (РАГА) и др.

10. Реакция преципитации. Получение бактериального Регистрация опыта с лизоцимом гаптена и
постановка реакции кольцепреципитации.

11. Реакция преципитации в геле (агаре) для определения:

а) природы антигена;

б) природы антител.

12.Реакция лизиса. Гемагглютинация, гемолиз.

13.Реакция связывания комплекса (РСК). Методика постановки РСК. Постановка основного опыта.

Методические указания

1. Приготовить корпускулярные антигены из культур аква вибриона и пищеварительной палочки. Для этого:

а) каждый студент получает одну Регистрация опыта с лизоцимом пробирку с соответственной культурой микробов и инспектирует её чистоту макро- и микроскопически; препарат-мазок окрасить по Граму;

б) приготовить взвесь микробов в физиологическом растворе, стерильной пипеткой добавить в пробирку с культурой 5 мл физиологичес­кого раствора и, вращая пробирку меж ладонями, смыть микробов со среды;

в) при помощи стерильной пипетки Регистрация опыта с лизоцимом перенести взвесь микробов в стерильную пробирку и прогреть ее для умерщвления микробов на водяной бане при температуре 70° в течение 30 минут для вибриона и 60 минут для пищеварительной палочки;

г) установить концентрацию микробов во взвеси при помощи опти­ческих эталонов, после этого приготовить нужное разведение антигена.

2. Способы иммунизации животных и получения иммунных Регистрация опыта с лизоцимом сывороток:

а) демонстрация разных методов иммунизации животных: подкожный, внутривенный и внутрибрюшинный методы введения антигенов;

б) демонстрация разных методов получения крови от иммунизированных животных: взятие крови из вен у зайчика и у лошадок, взятие крови из сердца у зайчика и морской свинки.

3. Реакция агглютинации:

а) приблизительная реакция на стекле. На незапятнанное предметное Регистрация опыта с лизоцимом стекло пастеровской пипеткой наносят каплю агглютинирующей противовибрионной сыворотки в разведении 1:25 и рядом (другой пипеткой) каплю физиологического раствора (контроль антигена). В ту и другую каплю пастеровской пипеткой добавляют по 1-2 капли взвеси вибриона. Осторожно перемешивают петлей антиген сначала с физиологическим веществом, а потом с иммунной сывороткой (но не напротив!). Чтоб Регистрация опыта с лизоцимом ускорить пришествие реакции агглютинации, предметное стекло, на котором делается опыт, рекомендуется немного покачивать и очень осторожно подогревать высоко над пламенем спиртовки. Наблюдают за агглютинацией невооруженным глазом либо пользуясь лупой. Реакция агглютинации более ясно видна, если глядеть на каплю снизу ввысь. Парадокс агглютинации проявляется образованием взвешенных хлопьев и просветлением воды в Регистрация опыта с лизоцимом капле с сывороткой. В контроль ной капле (физиологический раствор) жидкость сохраняет свою равномерную гомогенную мутность;

б) реакция агглютинации в пробирке. В опыт берут две пробирки, специально применяемые для реакции агглютинации. В одну из их добавляют 0,5 мл агглютинирующей сыворотки в разведении 1:25 (опыт), а в другую - 0,5 мл физиологического Регистрация опыта с лизоцимом раствора (контроль антигена). Потом в обе пробирки добавляют по 0,5 мл соответственного антигена, содержащего в I мл I миллиардов микробных тел. После смешивания пробирки помещают в термостат на 2 часа при температуре 370, после этого учитывают итог.

Реакция агглютинации на стекле: 1 – опыт; 2 – контроль Вибрион Расцветка по Граму

В опытнейшей пробирке жидкость станет Регистрация опыта с лизоцимом прозрачной (либо практически прозрачной), а на деньке пробирки выпадает осадок, который при встряхивании пробирки разбивается на свободно плавающие в воды хлопья. В контрольной пробирке жидкость сохранит равномерную и гомогенную мутность. При более продолжительном хранении пробирок (24 часа) в контрольной пробирке также может образоваться осадок, но при встряхивании пробирок он разрушается и Регистрация опыта с лизоцимом жидкость становится умеренно мутной.

Реакция агглютинации в пробирках: 1 – опыт; 2– контроль

4. Разбор способов изготовления 0- и Н-антигенов.

Реакция агглютинации на стекле с 0- и Н-антигенами. На незапятнанное отлично обезжиренное предметное стекло при помощи пастеровской пипетки наносят две капли сыворотки, содержащей 0- и Н-антитела. В одну аз их добавляют каплю антигена 0, в Регистрация опыта с лизоцимом другую - каплю антигена Н. Антигены перемешивают с сыворотками (воспользоваться различными петлями, либо петлю прокаливать после смешивания одной капли!). В капле, в которую был добавлен 0-антиген, появляется тонкодисперсный осадок агглютинат, а в капле с Н-антигеном - крупнохлопчатый агглютинат.

5. Реакция гемагглютинации. На незапятнанное стекло наносят пасте­ровской пипеткой каплю Регистрация опыта с лизоцимом агглютинирующей сыворотки (приобретенной при иммунизации зайчиков бараньими эритроцитами), рядом - другой пипеткой - каплю физиологического раствора. Потом в обе капли добавляют по одной капле 4 %-ной взвеси эритроцитов барана (не касаться пипеткой капли сыворотки!). При помощи бактериальной петли перемеши­вают добавленные эритроциты поначалу с физиологическим веществом, а потом с сывороткой (но не напротив Регистрация опыта с лизоцимом!). Реакция склеивания эритроцитов (гемагглютинация) происходит исключительно в опытнейшей капле. Она наступает резвее при покачивании стекла и аккуратном подогревании.

В контрольной капле склеивания эритроцитов не происходит, потому что там отсутствуют антитела.

Реакция агглютинации: 1 – О-агглютинация. 2 – Н-агглютинация. Гемагглютинация: 1- Опыт. 2- Контроль.

6. Определение титра агглютинирующей сыворотки. Для опыта нужно иметь:

а) агглютинирующую Регистрация опыта с лизоцимом сыворотку против аква вибриона в исход­ном разведении 1:25;

б) взвесь убитых вибрионов (диагностикум: содержащий в I мл I миллиардов микробных тел);

в) физиологический раствор;

г) две пипетки емкостью I мл и 5 мл ;

д) штатив с набором из 8 агглютинационных пробирок.

Порядок работы

1) пронумеровать все пробирки;

2) разлить по 0,5 мл физиологического раствора во Регистрация опыта с лизоцимом все пробирки, кроме первой;

3) налить в первую и во вторую пробирки по 0,5 мл сыворотки в разведении 1:25;

4) перемешать сыворотку с физиологическим веществом во 2-ой пробирке и перенести пипеткой (емкостью I мл) 0,5 мл в третью про бирку, после смешивания 0,5 мл разведенной сыворотки переносится таким же образом из третьей пробирки в Регистрация опыта с лизоцимом четвертую, из четвертой в пятую и т.д. до седьмой пробирки, из седьмой пробирки 0,5 мл воды удаляется. В восьмой пробирке сыворотки не должно быть. Она служит контролем антигена. После такового разведения сыворотки во все пробирки, но уже другой пипеткой, добавляют антиген по 0,5 мл. Пробирки энергично встряхивают совместно со штативом (для смешивания Регистрация опыта с лизоцимом антигена с антителом) и помещают в термостат при 370 на 2 часа, после этого читают подготовительный итог. Окончательный итог опыта регистрируют через 24 часа.


regionalnie-smi-monitoring-smi-rf-po-pensionnoj-tematike-3-iyunya-2010-goda.html
regionalnie-smi-monitoring-smi-rf-po-pensionnoj-tematike-9-noyabrya-2012-goda.html
regionalnie-smi-nia-novosibirsk-14022012-novosibirci-dorabotali-do-nakopitelnoj-pensii.html